注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

原理是由一對(duì)引物介導(dǎo)，能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增，經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴(kuò)增效率＝倍，使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
?
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

表沒食子兒茶素 CAS 970-74-1 *  規(guī)格： HPLC≥98%,20mg/支

胡屬苷 CAS 117479-87-5 *  規(guī)格： HPLC≥98%,20mg/支

牛蒡苷元; 牛蒡子苷元 CAS 7770-78-7 *  規(guī)格： HPLC≥98%,20mg/支

黃連堿 CAS 3486-66-6 *  規(guī)格： HPLC≥98%,20mg/支

12-O-tetradecayl p CAS 16561-29-8 *  規(guī)格： HPLC≥98%,5mg/支

新穿心蓮內(nèi)酯 CAS 27215-14-1 *  規(guī)格： HPLC≥98%,20mg/支

益母草堿 CAS 24697-74-3 *  規(guī)格： HPLC≥98%,20mg/支

常春藤皂苷元; 常春藤皂甙元 CAS 465-99-6 *  規(guī)格： HPLC≥98%,20mg/支

巖白菜素 CAS 477-90-7 *  規(guī)格： HPLC≥98%,20mg/支

三七皂苷Ft1 CAS  *  規(guī)格： HPLC≥98%,20mg/支

28-去-β-香樹脂 CAS  *  規(guī)格： HPLC≥98%,10mg/支

蘆丁;蕓香苷;蕓香葉苷;維生素P;蘆丁蕓 CAS 153-18-4 *  規(guī)格： UV≥98%,20mg/支

博落回總堿 對(duì)照品 CAS  *  規(guī)格： 50mg

比林 對(duì)照品 CAS  *  規(guī)格： 100mg;99.9％

（酸）慶大-小諾 標(biāo)準(zhǔn)品 CAS  *  規(guī)格： 100mg

登革病毒型PCR檢測試劑盒規(guī)格酵母II  Yeast II  分子量：*：68876-77-7

肉毒堿  Botulinum toxin  161.2分子量： C7H15NO3*：461-06-3

  122.55  Potassium perchlorate*：698078分子量： KClO3

乙聯(lián)  182.26096  Ethyl group*：40529-66-6分子量： C14H14

2--4-三氟甲嘧  163.1  2- -4- three*：16075-42-6分子量： C5H4F3N3

2,4-二巰-5,6-二嘧  174.25  2,4- two -5,6- two*：31295-41-7分子量： C4H6N4S2

納米鐵酸鈷  234.62  Nano cobalt ferrite*：12052-28-7分子量： CoFe2O4

清酸鉀  195.19  Potassium whey*：24598-73-0分子量： C5H3N2O4*K

萘酚綠B  Naphthol green B  878.46分子量： C30H15FeN3Na3O15*：19381-50-1

2--5-溴-6-甲吡  187.04  2- amino -5- -6-*：42753-71-9分子量： C6H7BrN2

3-氯酐  182.56  3- chloro phthalic anhydride*：117-21-5分子量： C8H3ClO3

技術(shù)原理：
 DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）
       發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個(gè)循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時(shí)也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。